1、安徽医科大学学报A c ta U n i s i t a t i s Me d ic i n a l is A n h u i 2 0 0 2 J u n 3 7 3 1 8 3 丹皮酚的体内外抗肿瘤作用 孙国平沈玉先张玲玲王华魏伟徐叔云 摘要目的研究丹皮酚在体外的细胞毒作用和体内抗肿 瘤作用 方法唾哇兰 MT 丁 体外试验法和灌胃给药体内 抗肿瘤试验 结果丹皮酚对体外培养的人红白血病细胞 K 5 m 人乳腺癌基因细胞T 6 7 和 肝癌细胞B E I 7 4 0 4 的半数 抑 制浓度 1 C 依次为2 5 3 8 m g L 1 0 8 1 m g L和9 3 3 9 m g L 体内 灌
2、胃给予 丹皮酚5 0 m g k g d 2 0 0 m g k g d 和8 0 0 tn g k g d ig x 1 4 d 对小鼠肿瘤H e p A的抑制率分别 为 3 9 2 6 一4 2 5 5 4 9 6 9 一5 5 3 2 和 6 4 4 2一 7 2 6 4 P 0 0 1 差异有显著性 结论丹皮酚在体外有 细胞毒作用 灌胃给药有抗肿瘤作用 主顺词牡丹皮酚尸 药理学 抗肿瘤药 中药 满 理学 小鼠 中图分类号8 2 8 4 1 文献标识码 A 文s编号 1 0 0 0 1 4 9 2 2 0 0 2 0 3 一0 1 8 3一 0 3 牡丹皮是安徽省道地中药材 药理研究表明
3、 牡丹皮的有效成分或部位具有解热镇痛 抗炎和免 疫调节 抑制血小板聚集 抗血栓形成和中枢抑制作 用 临床研究发现 在宫颈癌 肝癌 肺癌 喉癌 乳 腺癌等有效治疗方剂中 均包含有牡丹皮川 但对 牡丹皮抗癌作用的 有效成分及作用机制 国内 外均 未对其进行深入 研究 本研究 探讨了牡丹皮的主要 活性成分丹皮酚 P a e o n o l 的体内外抗肿瘤作用 公司 产品 M T T及R P MI 1 6 4 0 为S ig m a 公司产品 E L 3 0 1 S t r i p r e a d e r 酶标仪 为美国B i o T e K公司产 口 口口 1 2方法 1 2 1 体外 抑瘤试验采用
4、M T T法 按文献 2 3 描述的方法进行试验 取对数生长的 肿瘤细胞I x 1 护 L 接种于9 6 孔培养板 上 每孔0 2 m l 设不同 浓度的丹皮酚组 细胞对照组和空白对照组 各组设 4 个平行孔 悬浮生长的细胞直接加人不同浓度的 丹皮酚 置3 7 0 C 5 C q 培养箱中培养4 8 h 贴壁 生长的细胞需待细胞贴壁后再 加人不同 浓度的 丹皮 酚 继续培养4 8 h 实验终止前4 h 加人M T T液 再 培养4 h 测试 前加人D MS O 待结晶 溶解后在波长 5 7 0 n m处测每孔的A值 按下列公式求出生长抑 制率 生 长 抑 制 率 卜 卜 男 灌 爵 蓦 爱 氰
5、 1 0 0 材料和方法 1 1材料 1 1 1 肿瘤细胞株 人红白血病细胞株K 5 2 6 乳腺 癌基因 细胞株T 6 1 7 肝癌细胞株B E L 7 4 0 4 均由安 徽省医研所病毒室提供 肝癌细胞株H e p A由安徽 医 科大学临床药理研究所传代保株 1 1 2 动物 昆明种小鼠1 8 一2 2 g 早舍 兼用 由 本校实验动物中 心 皖医实动准字0 2 号 提供 1 1 3 试剂与仪器 丹皮酚注射液为上海第一制 药厂产品 丹皮酚原料由安徽医科大学临床药理所 植化室提供 环磷酞胺 C T X 为江苏恒瑞医药有限 以药物浓度为横轴 抑制率作纵轴 绘制生长 抑制曲 线 用回 归法求出I
6、 C s o 0 1 2 2 体内 抑瘤试验 在无菌条件下抽取生长7 d 的H e p A腹 水型小鼠 腹水 用生理盐水调节细胞浓 度 为 1 x l o m L 接种于小鼠右腋皮下 每只0 2 m l 随机分成对照组 C T X 2 0 m g k g 组和丹皮酚不 同 剂量组 每组 1 2 一1 4 只小鼠 接种2 4 h 后灌胃 给药 每日1 次 连用1 4 d o 停药次日 处死小鼠 称 体重和瘤重 按下列公式计算抑瘤率 n o d 1 籍鬓器U 1 0 0 数据处理 结 果 2 0 0 2 一 0 3 一 0 5 收稿 2 0 0 2 一 0 4 一 1 5 修回 基金项月 安徽省自
7、 然科学基金资助课题 编号 0 0 0 4 4 4 1 4 作者单位 安徽医科大学临床药理研究所 合肥2 3 0 0 3 2 作者简介 孙国平 男 4 1 岁 博士生 副主任医师 副教授 现在安徽 氏科 大学第 一附月 医院肿瘤 科 合肥7 3 0 0 2 2 工作 2 1 丹皮酚在体外对肿瘤细胞生长抑制作用 丹 皮酚3 9 1 一2 5 0 m g L对K 5 6 2 及几一 7 的生长均有 抑制作用 抑制率随药物的浓度升高而升高 其1 C 分 别为2 5 3 8 和1 0 8 1 m g L 对B E L 7 4 0 4 的抑 制 作用较差 在 3 1 2 5 m g L浓度下抑制率仅为
8、1 5 7 0 I C 5o 为9 3 3 9 m g L 见图t o 2 2 丹皮酚对小鼠移植性肝瘤H e p A的抑制作用 阳性对照药C T X 在2 0 m g 掩 d t i g x 1 4 d 对 万方数据 1 8 4安徽医科大学学报A c tor U n i v e e s it a t i s MFx d i c in a l i s An h u i 2 0 0 2J u n 3 7 3 表 1 丹 皮酚对 小鼠移植 性肿有 印A的抑制 率 组别 对照 CI X 丹皮酚 剂 量与方案 动 物数 只 平 均瘤重 后一1414 x1 44 立 一 哪勺 0 i8 体 重变化 9 1
9、 6 0 0 1 0 3 6 1 2 6 9 1 3 5 0 1 0 3 3 1 1 0 0 48 9 2 1 2 2 7 1 1 2 5 1 2 0 0 斗 1 0 8 3 9 4 0 x3 29 1R 0 1 抑 瘤率 t 0 7 7士0 5 4 1 8 9 士 1 2 5 1 5 0土0 6 7二 1 4 7 土 0 7 2 甘 1 3 3士0 7 2二 0 9 0士0 4 2 3 2 6 1 1 2 0 7 9 土 0 2 6 一 1 9 8士0 9 0 1 6 4 土 0 5 0 1 1 6士0 4 5二 7 6 6 0 4 2 5 5 5 4 41 5 5 3 2 5 9 5 7
10、7 2 6 4 黑 丹皮酚 7 5 7 7 3 9 2 6 4 9 6 9 6 4 4 2 131412121312佗121210 前一141414141414141212121212 2050100200400绷 2050姗绷 与 对 照组 比较 P 0 0 1 0090阴70阴朋叨朋朋 尹 荟 汗章 10 0仁 二 一 8 2 1 5 6 3 3 1 2 5 6 2 药 物浓度 m g L 圈 1 丹皮 醉在体 外对肿 细胞 生长抑 制作用 H e p A的 抑制率分别为7 6 6 0 和7 5 7 7 均P 0 0 1 显示明显差异 丹皮酚在5 0 8 0 0 m g k g d 均有明
11、显抑瘤作用 5 0 m g k g d 抑瘤率达 4 2 5 5 和3 9 2 6 9 6 当剂量增至8 0 0 m g k g d 时 抑瘤率高达 7 0 左右 在总共二批试验 1 5 8只小 鼠 中 死亡8 只 其中5 0 mg kg 剂量组死亡1 只 2 0 0 和4 0 0 m g k g d 剂量组各死亡2 只 8 0 0 m g k g d 一 剂量组死亡3 只 模型组和C T X对照组 均无死亡 皮酚3 9 1 25 0 m g L 对人红白 血病细 胞 K w 2 及人 乳腺癌基因细胞T 6 1 7 细胞的 生长均有抑制作用 药物浓度越高 抑制作用越强 其 1 C 5 分别为
12、2 5 3 8 m g 1 和 1 0 8 1 m g L 丹皮酚对小鼠移植性 肝癌1 3 K L 7 4 0 4 的生长 抑制较弱 I 5 为9 3 3 9 m g L 结果表明丹皮酚对肿瘤细胞的 生长抑制作用具 有浓度依赖性 对不同的细胞株有其选择性 丹 皮 酚5 0 m g k g d 1 ig x 1 4 d 对小鼠H e p A 的 生长即 有明显抑制作用 其抑瘤率达4 0 左右 随着剂量的增加抗肿瘤作用增强 文献川报道 丹 皮酚 给小鼠口服用药的日殆 为3 4 3 0 m g k g 本实 验 1 5 8只小鼠中共死亡8只 各剂量组小鼠死亡率 均低于2 0 9 6 用药后体 重均有
13、明 显增加 实验中观 察各组小鼠的 一般状态良 好 外观 毛色 大便 活动 等均正常 未见明显毒副作用 本研究结果表明 丹皮酚 在体外和 体内 试验均有 抗肿瘤作用 丹皮酚抗肿瘤作用的机制尚未见报 道 作者已对丹皮酚作用后细胞凋亡和凋亡相关基 因的表达进行了研究 初步发现丹皮酚可以通过影 响 凋亡相关基因F a s b c l 2 B a x 和p 5 3 的 表达 诱导 细胞凋亡而发 挥抗肿瘤作用 另文报道 3 讨 论 丹皮酚是牡丹皮的主要活性成分之一 研究表 明丹皮酚具有广泛的药理活性 包括解热 镇痛 抗 菌消炎 抗动脉粥样硬化 抑制血小板聚集及增强细 胞免疫功能和抗氧化作用 a 5 体外
14、研究还发现 丹皮酚能够逆转人红白 血病细胞株K 5 2 6 A D M细胞 的多 药耐药性 6 本实验对丹皮酚的抗肿瘤作用进行了研究 丹 参考文献 秀 宇彬抗癌 中药药理 与应用 第 I 版 哈尔滨 黑龙 江科学技 术出版社 1 9 9 9 6 7 5 6 8 0 S a r g e n t J M T a y lo r C G A p p ra is a l o f th e MI T a s s a y a s a r a p id t e s e o f he m o s e n s i ti v it y in a c u r e m y el o id l e u k e m ia
15、B r J C a n c c r 1 9 8 9 6 0 2 2 0 6 2 1 0 司徒镇强 吴军正 细胞培养 第I 版 西安 世界图书出版社 西 安公 司 1 9 9 6 1 8 6 1 8 7 张广 饮 禹 志颖 赵厚 长 丹皮 酚对 大鼠反 复性 脑缺 血 的保护 作 用 中药材 1 9 9 7 2 0 1 2 6 2 6 6 2 8 万方数据 安徽医科大学学报Ac ta Un i i ta t is Me d ic i n a l i s An h u i 2 0 0 2 f u n 3 7 3 1 8 5 褪黑素镇痛作用的依赖性及免疫增强作用 郝吉庆 沈玉先2 魏伟 徐叔云2 摘
16、要目的观察褪黑素 Mr的镇痛作用是否有耐受性和 依赖性及其对免疫功能的影响 方法依赖性观察采用小 鼠竖尾实验和跳跃实验 免疫功能的检测采用免疫器官称重 法 碳粒廓清实验及脾淋巴细胞增殖反应等 结果MT 4 0 m g k g g d x 7 d 川产生镇痛作用而无耐受现象 并能提高 C A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应 小鼠 c MT 3 5 0 mg k g 未出 现竖尾现象 M T 3 5 0 m g k g b i d x 5 d 后 用纳洛酮 5 mg k g 催瘾未出现跳跃现象 且对盐酸吗啡依赖小鼠的 跳跃实验无明显影响 MT 3 5 0 m g k g b id x 5 d 后 脾
17、胸腺 指数及碳粒廓清实验中 K a值高于溶媒组 提示 N T I 能显 著增加小鼠的非特异性免疫功能 盐酸吗啡3 0 mg k g b id x5 d 对小鼠的免疫功能有抑制作用 结论MT镇痛作用 无明显的耐受性及依赖性 并对免疫功能有促进作用 主题词褪黑激素 药理学 镇痛 免疫性 中图分类号8 9 7 7 1 文献标识码 A 文章编号 1 0 0 0 一1 4 9 2 2 0 0 2 0 3 一 0 1 8 5 一0 4 以 吗啡为 代表的麻醉性镇痛药 另一类是以阿斯匹 林为代表的非m体抗炎药 前者效能虽强 但易产 生耐受和依赖 并伴有机体免疫功能的降低 1 后 者虽无明显的依赖性 但镇痛作
18、用弱 不良反应较 多 因而限制了这两类药物的 使用 褪黑素 m e l a t o n in M 7 是松果腺分泌的主要活性物质 参与了 机体多种生理功能的调节 如调节昼夜节律和诱导 睡眠 2 并对阿片肤镇痛的昼夜节律有调节作 用 3 研究发现 松果腺上存在阿片受体 内源性 的M T参与创伤后的疼痛调节 4 提示内源性的 M T参与了疼痛调节 我们以往的研究表明 外源 性的M T有镇痛作用 并与At 替吮有协同作用 5 本研究拟在上述研究的基础上 进一步观察M T的 镇痛作用是否有依赖性及其对免疫功能的影响 材料和方法 目 前临床上使用的镇痛药主要有两类 一类是 2 0 0 2一 O l 一
19、4 收稿 2 0 0 2 一 0 3 一2 1 修 回 作者单位 安徽医科大学第一附属医院 肿瘤科 合肥2 3 0 0 2 2 2 安徽医科大学临床药理研究所 合肥2 3 0 0 3 2 作者简介 郝吉庆 女 3 2 岁 硕上 主治医师 徐叔z 男 7 0岁 教授 博 t 生导师 中国药理学会副理 事 长 1 1 动物昆明种小鼠 由安徽医科大学实验动物 中心 皖医实动准字0 1 号 提供 1 2 仪器 D Y Q D I 型多 头细胞收集器 绍兴坡塘 医疗器械厂 F J 2 1 0 7型液闪计数仪 西安 2 6 2 厂生 产 Y J 1 4 5 0 型医 用净化工 作台 苏州净化设备公司 产品
20、 N a p c o 6 1 0 0 C Q z 培养箱 美国杜邦公司产品 7 2 1 型分光光度计 上海第三分析仪器厂 章灵华 尚培根 黄艺等 丹皮酚的药理与临床研究进展 中国中 西医结 合杂志 1 9 9 6 1 6 3 1 8 7 1 8 9 孙慧君 王晓琦 于丽敏等 丹皮酚对卜 门 R逆转作用的研究 解M 1 科学进展 2 0 0 0 6 1 5 9 6 2 A n t i t u m o r e f f e c t o f p a e o n o l i n v i t r o a n d i n S u n G u o p i n g S h e n Y u x ia n Z h
21、a n g L i n g l i n g e t a l I n s t i t u t e o f C l i n i c a l P h a r m a c o l o g y A n h u i Me d i c a l U n i v e r s i t y H e f e i v l v o 2 3 0 0 3 2 A b s t r a c t O b j e c t i v e T o i n v e s t ig a t e t h e a n t i t u mo r e f f e c t o f p a e o n o l i n v i t r o a n d i n
22、 v i m Me t h o d s M I T a s s a y a n d a n t i t u m o r t e s t i n v i m w e r e u s e d R e s u l t s I C 5 0 o f p a e o n o l o n K 5 6 2 c e l ls T 6 一 1 7 c e ll s a n d B E L 7 4 0 4 c e ll s w e r e 2 5 8 3 1 0 8 1 a n d 9 3 3 9 m g L r e s p e c t iv e ly Un d e r t h e d o s e o f 5 0
23、2 0 0 8 0 0 mg k g d f o r 1 4 d t h e i n h i b i t o r y r a t e s o f p a e o n o l o n H e p A i n m i c e w e r e 3 9 2 6 一4 2 5 5 4 9 6 9 一5 5 3 2 a n d 6 4 4 2 一 7 2 6 4 r e s p e c t iv e l y C o n c l u s i o n P a e o n o l p o s s e s s e s a n t i t u m o r a c t i v i t i e s i n v i t r o a n d i n v i m M c S H p a e o n o l 小h a r m a c o lo g y a n t i n e o p l a s t i c d r u g s T C D 巾h a r m a m lo g y m ic e 万方数据
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